Vic，9291耐药机制分析，仅供参考{2017.3.11}

风风雨雨 发表于 2017-3-10 12:19

                               
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一代耐药直接9291也太片面了吧！2992靶向分子与egfr结合方式不同，而且多靶点，也不可逆，不考虑吗？直接 ...

不考虑……你也可以按你说的给你家人试，我不拦着

不追求完美 发表于 2017-3-10 00:37

                               
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依维莫司还有一个功能就是免疫抑制剂，而pd1是免疫治疗，从这个角度讲会不会起对抗作用而影响疗效呢？

啊。。。。希望的气泡又一次破灭了。。。

看来目前pd1能否起效只能寄托于运气了。

vic 发表于 2017-3-10 13:29

                               
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不考虑……你也可以按你说的给你家人试，我不拦着

我们家已经试了，一直都是盲试，没做基因突变检测，目前轮换到4002+易，按步就班的方法，早已不适合了！！我没有说的意思，你不要误会。只是有好的方案，我们要拿出来分享。

风风雨雨 发表于 2017-3-10 14:56
我们家已经试了，一直都是盲试，没做基因突变检测，目前轮换到4002+易，按步就班的方法，早已不适合了！ ...

这些渐进式的方式，
是民智未开阶段，药物没有FDA，
没有指导用药的时候，前人生命实践出来的

我尊敬，但是，更相信专业指导

为楼主点赞，同为文科生，你的钻研精神值得学习！

又多了个思路，为楼主点赞！望继续分享。
我妈9291联易6个月之后，开始耐药，在诺禾做了全血二代基因检测，全阴。据华大说，正在吃靶向药的，突变的基因残骸已经被靶向药清除，因此很难测出来。需要停止靶向药3周在测，问题是无法停药啊。

新药图片

资料来源
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/anie.201605011/full


表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor, EGFR）
抑制剂作为非小细胞肺癌的治疗药物在临床上有着广泛应用。
但是由基因突变带来的耐药问题一直困扰着广大临床医生和肿瘤患者。
EGFR常见的耐药突变有L858R和T790M，以及近些年发现的C797S突变。

目前，在全球研发的EGFR抑制剂当中，
第三代抑制剂对T790M突变的EGFR能显示出较高的活性。
其中，代表性化合物有诺华公司的Nazartinib (EGF816)，
阿斯利康公司的Osimertinib (AZD9291)和Clovis公司的Rociletinib (CO-1686)等。

上述抑制剂的主要机制则是
通过迈克尔加成反应使得抑制剂和EFGR中ATP结合区域的Cys797形成共价键，
进而阻止ATP与EGFR的结合起到抑制作用。
当然，C797S突变则会阻止抑制剂与Cys797共价键的形成。
正因如此，针对L858R/T790M突变和L858R/T790M/C797S突变开发新型EGFR抑制剂就显得意义重大。




图片来源：Angew. Chem. Int. Ed.

近日，德国多特蒙德工业大学的Daniel Rauh教授等
在Angew. Chem. Int. Ed.杂志上发表文章公开了他们发现的3个新型EGFR抑制剂。
老规矩，咱们还是先把活性分子放出来供大家欣赏。
（Insight into the Inhibition of Drug-Resistant Mutants of the Receptor
Tyrosine Kinase EGFR. Angew. Chem. Int. Ed., 2016, 55 10909-10912, DOI: 10.1002/anie.201605011）




图片来源：Angew. Chem. Int. Ed.


作者在文中开门见山表示，
他们的目标是针对T790M突变的EGFR开发更有效的新型抑制剂。
大家可以脑补一下通讯作者接受采访被问到开发策略时的画面。

闲言少叙，书归正传。
作者简述了他们设计抑制剂的两个理念：
第一，优化亲电基团使Cys797烷基化得到共价不可逆抑制；
第二，针对靶点疏水特性，加入亲脂官能团来增强对T790M突变型EGFR的选择性，
并且避免和守门残基甲硫氨酸产生空间位阻作用。
在构建分子骨架上，作者选择了能和激酶铰链区结合（hinge-binding）的常见结构4-氨基吡唑并嘧啶作为母核；
选择共价激酶抑制剂中常见的丙烯酰胺片段作为迈克尔加成受体；
在母核的3位引入了常见的刚性亲脂基团。老规矩，咱们还是结构式说话。


正如作者在文中所说，这些分子很容易合成。
有多容易呢，作者都不稀得让合成路线在正文中露个脸。
好吧，我知道你们这些有机达人们在看到开场结构式的时候
已经把合成路线在脑子里写了好几遍啦。


好啦，我们还是接着说小目标吧。
这仨化合物一测活性，全部达到纳摩尔（nM）浓度级别的活性。
其中，化合物1c对L858R/T790M突变型的IC50甚至小于1 nM，
对L858R/T790M/C797S突变型的IC50达到了88 nM，这活性水平直逼上市药物AZD9291。
并且，作者通过动力学常数（Ki, kinact和kinact/Ki）的测定数进一步解释了各化合物活性差异的原因。
看来对作者来说，nM级别的抑制剂真是小目标啊。
同时，作者又在细胞水平上对这三个化合物进行了评价，
三个化合物对野生型EGFR和L858R/T790M突变型的抑制浓度相差30-40倍，
活性水平与EGF816和CO-1686相当，稍逊于AZD9291。
随后，作者验证了化合物1c对EGFR下游蛋白（Akt，MAPK和S6）磷酸化状态的影响进一步证明了其对EGFR的抑制作用。



图片来源：Angew. Chem. Int. Ed.


随后，作者又评价了化合物1a和1c的细胞吸收行为，
结果表明这两个化合物具有良好的细胞渗透性和吸收性。
既然做激酶抑制剂，那么该走的套路还是要走的，比如广谱激酶抑制作用。
作者评价了化合物1a对100种激酶的生物活性。

结果表明，化合物1a对EGFR突变体
（EGFR-L861Q、L858R、T790M和L858R/T790M）
均表现出很强的抑制作用，对大部分激酶没有明显抑制作用。


图片来源：Angew. Chem. Int. Ed.


最后，作者祭出了小分子与蛋白共晶这种大杀器，
报道了化合物1a和1b分别与T790M突变型EGFR的共晶结构，
可以发现1a或1b均与Cys797形成了共价键，
吡唑并嘧啶母核与铰链结合区存在氢键作用（图中虚线所示），
3位甲基吲哚基或萘基插入到守门残基M790和K745烷基侧链形成的疏水口袋中。



图片来源：Angew. Chem. Int. Ed.


严谨的德国人为了证明他们设计分子的理念真的实现了，
居然还用质谱对抑制剂-蛋白复合物进行了分析，
证明了抑制剂与蛋白是1：1共价结合，结合位点是Cys797。
德国人真严谨啊。


同志们，我再在补充几句啊。
我反复阅读了原文总觉得这文章有个小遗憾。
化合物1c对L858R/T790M/C797S突变型的抑制作用好于1a和1b十倍百倍，
如果能得到1c与L858R/T790M/C797S突变型EGFR的共晶结果或生物质谱结果那就完美了。
声明一下，我可不是追求完美的处女座哦，也许德国学者们觉得还没有得到足够严谨的结果吧。
我总觉得过不了多久在其他高水平期刊上就能看到化合物1c的相关故事，
等我扒到以后再和大家分享，咱们拭目以待吧。



（本文由乐只君子供稿）

资料整理，收集
来源；中国肿瘤精准治疗协会